作者:陈泉(医院)李安强(医院)史浩(医院)温世奇(医院)董方(医院)牛启兵(医院)
摘要：目的探讨低分子肝素在治疗急性下肢静脉血栓中对白细胞介素6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的影响及其机制。方法80只雄性SD大鼠采用双侧股静脉结扎联合后肢石膏固定法造模，再将造模成功后12小时有血栓形成的大鼠随机分为对照组、1次给药组、3次给药组，分别用生理盐水和低分子肝素进行干预，第一次干预后3h，处死对照组与1次给药组所有大鼠，并取其股静脉血管及其主要属支，采用Trizol一步法提取总RNA，运用RT-PCR检测组织中IL-6、TNF-α含量。同法于2日后最后一次给药3h后处死3次给药组。结果：与空白对照组比较，1次给药组和3次给药组深静脉内皮组织中的IL-6、TNF-α的含量明显降低，均有统计学意义（P＜0.01）。且后两组之间比较，3次给药组中TNF-α含量更低，同样也具有统计学意义（P＜0.01）。结论：低分子肝素（LMWH）对血栓模型中炎症因子IL-6、INF-α均明显的降低表达，在血栓的抗炎过程发挥重要作用。
关键词低分子肝素白细胞介素6肿瘤坏死因子-α大鼠深静脉血栓形成
Applicationresearchmentofthelowmolecularheparinanti-inflammatoryresponseontreatmentofpostAcuteDVT
ChenQuanLiAnqiangShihaoWenShiqiDongFangNiuQIbinSunWanli(Thepeople’shospitalofGansuProvinceGansuLanzhou)
[Abstact]ObjectiveToinvestigatetheeffectanditsmechanismofinterleukin6(IL6)andtumornecrosisfactoralpha(TNFalpha)thelowmolecularheparinontreatmentofpostAcuteDVT.Methods80maleSDratsinmodelgroupunderwentbilateralfemoralveinclampingplusplastercastimmobilizationofthehindlegstuinducehinglimeDVT.Itwererandomlydividedintomodel,adruggroup,threedruggroupafter12h.Itisintervenewithnormalsalineandlowmolecularheparin.Itwereutedinthemodelgroupandadruggroupofallrats,andtokethefemoralveinbloodvesselwiththemainbranch.WeextractedthetotalRNAusingTrizolone-step,andtestedorganizationIL-6,contentofTNF-αusingRT-PCRafterthefirstinterventionat3h.Itwereutedthethreedruggroupofthesamemethodtogivemedicineafterin2daysof3h.Result:It
real-timePCR结果显示：与空白对照组比较，1次给药组和3次给药组深静脉内皮组织中的TNF-α含量明显降低，均有统计学意义（P＜0.05）。且后两组之间比较，3次给药组中TNF-α含量更低，同样也具有有统计学意义（P＜0.05）（图2）。
3讨论
低分子肝素(lowmolecularweightheparin，LMWH)是由普通肝素(unfractionatedhePari，UFH)经酶解或化学降解的方法而得的相对分子质量为-Da，平均为0Da左右的混合物。LMWH除作为抗凝抗血栓药等在临床上广为应用外，近年来其抗炎活性也颇受重视[5]。静脉血栓栓塞作为常见的血栓疾病之一，其发病率近年来有逐渐上升的趋势。根据相关统计数据，未进行血栓早期诊断和预防的住院患者在外科手术中发生静脉血栓栓塞的比例可达15％~40％，其中，DVT约占90％[6-8]。越来越多的研究显示，炎症与血栓形成之间有着密切的关系，一方面炎症促进高度凝集状态，另一方面血栓形成过程中的物质也可以引起炎症[7-9]。IL-6是由体内很多细胞包括免疫和非免疫细胞等多种细胞分泌而来的，可以作用于血管细胞，在应激和免疫反应中起着重要作用，是炎症反应的重要介质，又称为前炎症细胞因子。TNF-α主要由活化的单核巨噬细胞产生，它可直接损伤血管内皮，诱导血管内皮细胞产生血小板活化因子，抑制具有抗凝血酶作用的蛋白C活化[10-11]。
Wan等[12]研究发现给小鼠注射0u/kgLMWH能抑制TNF-α诱发的白细胞在内皮细胞上的滚动、黏附和组织浸润。而且，这种抑制作用并不是直接通过降低肠内TNF-α的含量实现的，提示抑制肠粘膜细胞因子并不是LMWH抗炎的主要机制，而且，实验发现LMWH显著降低结肠粘膜中髓过氧化物酶(MPO)的活性，表明LMWH对中性粒细胞积聚的抑制可以很好地解释LMWH抗炎机制，进而提示LMWH很可能通过干扰炎症细胞的组织浸润而起到有效的抗炎作用。LMWH的抗炎作用还表现在体外抑制中性粒细胞的趋化及吞噬作用。次级淋巴组织趋化性细胞因子(CCL21)是T细胞的一个重要趋化因子，LMWH通过抑制内皮细胞表达CCL21，进而阻断T细胞向炎症部位的趋化运动，进而减少了T细胞向炎症组织迁移的数量，最终降低了T细胞引起的炎症反应，减少了自身免疫性疾病中T细胞对组织的破坏[13-15]。
炎症反应是多种因子、细胞参与的复杂的病理生理过程，对LMWH的抗炎机制研究主要集中在LMWH对炎症细胞、炎症因子及豁附分子的作用。目前还没有一种机制能够较好地解释不同实验的抗炎作用，如TNF-α的研究，韩红等[16]的实验表明LMWH可能通过下调炎症介质IL-6，INF-α的表达而实现抗炎作用。Wan研究发现LMWH很可能通过干扰炎症细胞的组织浸润而抑制TNF-α诱发的白细胞在内皮细胞上的滚动、黏附和组织浸润，起到有效的抗炎作用，不同的实验结果也表明LMWH很可能通过多种作用机制起到抗炎作用，而不同作用机制之间可能存在着密切联系。
本研究利用双侧股静脉结扎联合后肢石膏固定法造模，发现低分子肝素给药组大鼠静脉内皮组织中IL-6，INF-α的含量明显低于空白对照组，且3次给药组大鼠静脉内皮组织中IL-6，INF-α的含量有低于1次给药组，两者同时具有统计学意义。IL-6，INF-α在深静脉血栓形成过程中发挥着重要作用，LMWH对血栓模型中的IL-6、INF-α均有明显抑制作用，然而其涉及到信号通路和内在机制却十分复杂。本实验对低分子肝素抗炎作用及机制研究奠定了一定基础，同时也为今后临床诊断及治疗提供了一定的理论依据。
参考文献（略）
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